郭帅 , 陈梦仟 , 朱新术 , 周晨妍 , 王燕

河南省高校合成生物学改造工程与应用重点实验室, 新乡医学院生命科学技术学院, 新乡, 453003
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2018 年, 第 37 卷, 第 41 篇   
收稿日期: 2017年01月17日    接受日期: 2017年03月11日    发表日期: 2018年04月16日

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琼胶酶（agarase）是一类能够降解琼脂糖的糖苷水解酶，在保健食品、医药、化妆品等行业极具应用价值。本研究旨在纯化大肠杆菌BL21(DE3)plySs表达的以包涵体状态存在的重组琼胶酶rAga0917，并对纯化的包涵体蛋白的复性条件进行优化，以获得大量高活性的琼胶酶蛋白。用单因素实验，每次以单一复性条件为变量，用透析复性法探索了初始蛋白浓度、透析时间、温度、非离子去垢剂Triton X-100、甘油等对重组琼胶酶rAga0917包涵体复性的影响。实验结果显示，通过Ni²⁺柱亲和层析，获得了纯度95%以上的蛋白。纯化蛋白浓度低于65 μg/ml时，复性蛋白的酶活性与初始蛋白浓度成正比；4 °C复性的蛋白，其琼胶酶活性明显高于25 °C；随着透析时间的增长，复性效果越来越好；实验还同时发现复性液中的甘油能有效地辅助重组琼胶酶rAga0917复性。

琼胶酶；包涵体；纯化；复性；酶活力